第一場　エルミーロの家の一室。ロドリーゴがやってきて、デズデーモナにもう一度自分との結婚を考えてくれるように言い寄るが、彼女はすでにオテロと秘密裏に結婚していると伝えるので驚き、オテロに激しい敵意を抱く。ロドリーゴがあまりにも興奮して帰っていったので心配になったデズデーモナは、オテロにすぐ会いに来てくれるよう侍女のエミーリアに伝言を頼む。
　第二場　オテロの家の庭。一方でオテロは、デズデーモナがロドリーゴと結婚するのではないかと疑いを抱き始める。そこにイアーゴが現れて、デズデーモナが書いた一枚の手紙をオテロに見せる。それをロドリーゴに宛てたものと誤解したオテロは逆上して激しく彼女を罵り、必ずや彼女を殺してやると叫ぶ（二重唱「俺の目はごまかせぬ」）。イアーゴは自分の奸計の成功にほくそ笑む。 イアーゴと入れ替わりにロドリーゴが現れる。彼はデズデーモナがオテロと結婚してしまったことを知り、オテロとの友好関係を取り戻そうとする。だが嫉妬に狂ったオテロがロドリーゴに決闘を挑もうとしたところに、デズデーモナが駆けつけて二人の間を仲裁しようとする。しかし自分を見失ったオテロは彼女の懇願にも耳を傾けず、ロドリーゴと決闘するために出ていくので、デズデーモナは気を失う。エミーリアが駆け寄って彼女を助け起こすが、デズデーモナはオテロの身を案じている。集まって来た人からオテロの無事を聞いたデズデーモナは一安心するが、彼女の前に現れたエルミーロはお前に天罰が当たるだろうと言い、名誉を傷つけられた怒りを表す。


　第三幕


　デズデーモナの寝室。エミーリアは悲しみに打ちひしがれたデズデーモナを優しく慰める。外からゴンドラ漕ぎの悲しげな歌が聞えると、彼女は失恋して悲しんでいた昔の小間使いイザウラを思い出して歌う（「柳の歌」）。エミーリアが退いた後、デズデーモナは神に祈りを捧げてから眠りにつく。短剣を手にしたオテロが部屋に入った時、激しい雷鳴の音でデズデーモナは彼に気づき、「いとしい人」と言って目を覚ます。彼女は夫の形相に驚いて無実を懸命に訴えるが、息詰まるやり取りの末、オテロは彼女を殺してしまう。 その時部下が駆け込んできて、イアーゴの悪事が暴露されたことを伝え、エルミーロやロドリーゴもやって来てオテロに対する誤解を詫びる。しかし、オテロはもう手遅れだと言ってベッドで死にゆくデズデーモナの姿を見せる。オテロは自分の早まった行為を償おうと、愛する妻の手を握ったまま自分の胸に短剣を刺す。

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